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磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)是一種細胞膜活性物質(zhì),正常細胞中,其位于細胞膜脂質(zhì)雙層內(nèi)側(cè),在細胞凋亡的早期,PS可從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面。凋亡早期:磷脂膜(PS)外翻,但是細胞膜保持完整性,因此PI(與DNA結(jié)合)染色為陰性。AnnexinV是一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,可以與凋亡早期外翻的磷脂膜(PS)結(jié)合。凋亡中晚期:磷脂膜(PS)外翻,但是細胞膜被破壞,AnnexinV和PI分別與磷脂酰絲氨酸和DNA結(jié)合。壞死細胞...
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細胞轉(zhuǎn)染常用的轉(zhuǎn)染試劑很多,其中,Lipo3000深受廣大科研工作者的喜愛,那我們來看看Lipo3000細胞轉(zhuǎn)染的實驗步驟及注意事項吧!一、實驗前準備Lipofectamine™3000轉(zhuǎn)染試劑(ThermoFisher)、Opti-MEM(可以用無血清的培養(yǎng)基代替)二、實驗步驟1.接種細胞,使其在轉(zhuǎn)染時達到70–90%匯合度。注:對于HEK293,6孔板一般鋪50萬個細胞左右。對于PC9,24孔板一般鋪5-10萬個細胞。由于不同細胞,生長狀況不太一樣,需要根據(jù)情...
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隨著分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,細胞轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究真核細胞基因功能的常規(guī)工具。常用于研究基因功能、基因表達調(diào)控、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中,其應(yīng)用非常廣泛。既然細胞轉(zhuǎn)染如此重要,那影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些?讓我們一起來看看吧!一、轉(zhuǎn)染試劑不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,因此在轉(zhuǎn)染實驗前需要根據(jù)細胞特性選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑??梢酝ㄟ^已發(fā)表文獻和轉(zhuǎn)染試劑提供的已成功轉(zhuǎn)染的細胞株來進行選擇。二、細胞狀態(tài)轉(zhuǎn)染前細胞活力和總體健康狀況是轉(zhuǎn)染產(chǎn)生變異性的重要來源。一般建...
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隨著分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,細胞轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究真核細胞基因功能的常規(guī)工具。常用于研究基因功能、基因表達調(diào)控、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中,其應(yīng)用非常廣泛。目前實驗室最為常用的細胞轉(zhuǎn)染方法有兩種:脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法和電穿孔法,接下去分別介紹這兩種方法的原理、特點和實驗步驟。一、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法1.原理陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子包裹入內(nèi),形成DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞(見下...
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AeonianBiotech,一家荷蘭的生物技術(shù)公司,以抗體的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售和服務(wù)為主營業(yè)務(wù)。AeonianBiotech主營產(chǎn)品為抗體,AeonianBiotech抗體好嗎?市場接受度如何呢?AeonianBiotech的特色主要是:重組兔和重組小鼠抗體、小鼠單克隆抗體和多克隆磷酸特異性兔抗體等,重組抗體由參與與靶蛋白特異性結(jié)合的可變區(qū)的DNA序列定義??贵w不再由傳統(tǒng)的雜交瘤產(chǎn)生,而是在轉(zhuǎn)染的細胞系中瞬時或穩(wěn)定表達。隨著時間的推移,這種抗體的特性和性能不會因雜交瘤中常見的...
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