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如何選擇熒光定量PCR中的對照？

對照的目的是對檢測的各個環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)控，因此我們按照檢測的流程對對照進(jìn)行梳理。那么我們應(yīng)該如何選擇熒光定量PCR中的對照呢？讓我們一起來看看吧！一、陽性對照和陰性對照陽性對照和陰性對照是指在相同的處理條件下，比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品，都進(jìn)行了提取和擴(kuò)增最終獲得了陽性結(jié)果和陰性結(jié)果。陰陽性對照強(qiáng)調(diào)處理過程與樣品一致，并且有明確的預(yù)期結(jié)果。二、擴(kuò)增對照我們通常說的陽性對照和陰性對照指的是擴(kuò)增試劑盒中附帶的不需要提取的陽性對照和陰性對照，更準(zhǔn)確的定義應(yīng)該是擴(kuò)增陽性...

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你知道熒光定量PCR的應(yīng)用嗎？

熒光定量PCR（Real-timePCR），是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時檢測,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。那么你知道熒光定量PCR的應(yīng)用嗎？讓我們一起來看看吧！一、分子生物學(xué)研究1.核酸定量分析：對傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測,比如近期流行的甲型H1N1流感，轉(zhuǎn)基因動植物基因拷貝數(shù)的檢測，RNAi基因失活率的檢測等。2.基因表達(dá)差異分析：比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差...

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你知道細(xì)胞凍存的原理和實(shí)驗(yàn)步驟嗎？

細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常用技術(shù)。那么你知道細(xì)胞凍存的原理和實(shí)驗(yàn)步驟嗎？讓我們一起來看看吧！原理：將細(xì)胞放在-196℃液氮中，可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)，減少細(xì)胞代謝，理論上儲存時間幾乎是無限的。最佳的冷凍條件是盡可能地降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成，減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷。上述要求可通過下列方法獲得：1.緩慢冷凍，使細(xì)胞內(nèi)水分離開細(xì)胞，但不可太慢，以避免冰晶形成；2.用親水的低溫保護(hù)劑排除水分；3.在盡可能低的溫度下保存細(xì)胞，降低高濃度鹽對冰中蛋白質(zhì)變性的...

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細(xì)胞凍存有何注意事項？

細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常用技術(shù)。原理是將細(xì)胞放在-196℃液氮中，可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)，減少細(xì)胞代謝，理論上儲存時間幾乎是無限的。那么細(xì)胞凍存有何注意事項呢？讓我們一起來看看吧！一、DMS0稀釋時會釋放大量熱量，不能直接加到細(xì)胞液中，須事先配制，且DMSO必須是細(xì)胞培養(yǎng)級別的；二、緩慢冷凍，細(xì)胞逐步脫水，不會因產(chǎn)生大的冰晶而受到損害；三、選擇細(xì)胞生長良好、密度約為80-90%、活力達(dá)90%以上的細(xì)胞凍存；四、凍存時細(xì)胞密度少于5X105個活細(xì)胞/mL時，很難成功復(fù)蘇；五、...

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如何區(qū)分各種PCR技術(shù)？

PCR是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，PCR技術(shù)有很多，那么我們應(yīng)該如何區(qū)分各種PCR技術(shù)呢？讓我們一起來看看吧！一、普通PCRPCR是普通PCR，以雙鏈DNA為模板，以dNTP為底物，特異性地擴(kuò)增雙鏈DNA。然后采用瓊脂糖凝膠電泳對產(chǎn)物進(jìn)行檢測，只能做定性分析。二、實(shí)時熒光定量PCRqPCR和Real-timePCR是實(shí)時熒光定量PCR，以cDNA為模板，以dNTP為底物，對擴(kuò)增出的DNA進(jìn)行定量分析。實(shí)時熒光定量PCR常用的方法：水解探針法和熒光染料法...

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